拉曼光谱应用挑战和考虑因素

拉曼光谱虽有许多优点，但有时仍需要克服一些实际挑战。所有拉曼仪器上都会发生这些问题。我们提供的解决方案可帮助您充分发挥拉曼系统的理想性能。

以下是一些实用的解决方案和建议。

1.拉曼效应相对较弱

雷尼绍的拉曼系统采用高效光学设计和超灵敏探测器。

2.强荧光背底会掩盖拉曼谱带

当使用多激光系统时，您可切换至一个不同的激发波长。例如，从可见光切换至近红外激光（如785 nm），通常可以减低荧光强度，从而有助于生成具有清晰拉曼谱带的光谱。

3.许多样品表面凹凸不平

过去，对不均匀样品进行拉曼成像十分困难。现在，借助LiveTrack实时聚焦追踪技术，雷尼绍显微拉曼光谱仪可以在采集数据时自动保持聚焦。您可以轻松研究化学成分和结构如何随表面形貌而变化。

4.玻璃容器和显微镜盖玻片会掩盖样品的拉曼谱带

a.将玻璃显微镜盖玻片替换为不锈钢盖玻片。

b. 对于生物细胞，可以使用镜面抛光不锈钢、CaF2或MgF2显微镜盖玻片。

c. 用石英代替标准玻璃容器，石英在785 nm波长下产生的背底低于标准玻璃。

5.容器和衬底也会影响光谱

您可以控制共焦显微拉曼光谱仪和拉曼分析仪的共焦程度。将高数值孔径 (N.A.) 显微镜物镜与高度共焦仪器设置相结合，可大幅减少采样体积。这有助于消除来自衬底或容器物质的任何不需要的背底数据。

在分析透明容器中的块状样品时，您可以使用低数值孔径镜头聚焦到容器中。这是增强目标物质的拉曼信号，并尽量减少容器对光谱的干扰的另一种方法。

6.高激光功率会损坏样品

我们使用激光产生拉曼散射。拉曼信号与激光功率成正比，因此功率越大，通常信号越强。

然而，所有样品都有一个激光功率密度阈值，一旦超过该阈值，则可能会导致样品发生结构或化学变化。我们的解决方案如下：

a.高通量光谱仪设计；您可以用非常低的激光功率产生强拉曼信号。

b.激光功率由软件控制且可重复。这样，您就可以确定您的样品不会发生变化。

c.使用线聚焦模式将入射激光功率分散到较大样品区域上。使用显微拉曼光谱仪，RA802药物分析仪和RA816生物分析仪均可实现这种解决方案。

7.软件自动去除宇宙射线

宇宙射线是来自地球大气层以外的高能粒子。如果宇宙射线在数据采集过程中影响探测器，光谱中就会出现高强度尖峰。大面积拉曼图像中通常包含数千个宇宙射线伪影。

WiRE软件可以完全自动从包含多达5,000万个光谱的大面积拉曼图像中去除宇宙射线。然后我们可以自动运行数据分析工作流程，以生成可靠的结果。

拉曼图像的空间分辨率

以下因素决定着显微拉曼光谱仪的空间分辨率：

• 激光光斑尺寸

这是物镜数值孔径 (NA) 和激光波长的函数。简而言之，较高的数值孔径和较短的波长会产生较小的光斑尺寸。

• 样品上光谱采集点之间的间距（采样）

这是样品台的功能。雷尼绍的MS30高速光栅尺反馈平台具有较大的行程范围和低至50 nm的小步长。这些步长小于受衍射限制的最小激光光斑尺寸。

• 光谱仪中光学器件的放大倍数及CCD像元尺寸

它最终受限于光的固有波形本性，达到略小于微米级的水平。